引物作為分子生物學(xué)和遺傳學(xué)領(lǐng)域中最基本的工具之一，它們?cè)谠S多應(yīng)用中都發(fā)揮著重要的作用，包括PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR、基因突變分析、克隆和基因表達(dá)以及DNA測(cè)序等。
作為引物合成的關(guān)鍵原料，DNA亞磷酰胺單體，其質(zhì)量的可靠性和雜質(zhì)水平對(duì)引物的質(zhì)量和后續(xù)的生物試驗(yàn)起到至關(guān)重要的作用。
引物合成的文獻(xiàn)方法有不同路徑，目前主流的合成方法為固相亞磷酰胺三酯法，經(jīng)過數(shù)十年的行業(yè)發(fā)展，商業(yè)化的合成儀可以完成從微克到公斤級(jí)的寡核苷酸包括引物的合成制備。然而在固相亞磷酰胺三酯法中，依然會(huì)出現(xiàn)基因突變（雜質(zhì)寡核苷酸），除了關(guān)注反應(yīng)過程中使用的溶劑、催化劑、輔料等，核心的關(guān)注點(diǎn)之一在于DNA亞磷酰胺單體的純度、水分、雜質(zhì)等因素。
浙江恒康藥業(yè)股份有限公司NNaA平臺(tái)，得益于近20年的小分子化合物合成、純化、雜質(zhì)研究、藥品法規(guī)的經(jīng)驗(yàn)積累，持續(xù)穩(wěn)定地提供高品質(zhì)DNA亞磷酰胺單體，為全球引物合成、基因合成企業(yè)保駕護(hù)航。
DNA亞磷酰胺單體的雜質(zhì)淺析
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我們將亞磷酰胺單體結(jié)構(gòu)分為上圖6個(gè)基團(tuán)，其中DNA亞磷酰胺單體紫色X為空。紅色戊糖環(huán)通常不會(huì)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生影響。
- 綠色膦保護(hù)基團(tuán)，在DNA亞磷酰胺單體的合成過程中，因?yàn)殪⒃噭┳鳛槠鹗荚现唬滟|(zhì)量問題，從而導(dǎo)致P的保護(hù)不到位，或是有其他膦基團(tuán)（雜質(zhì)），在引物合成中，導(dǎo)致5’-3’不能反應(yīng)或是產(chǎn)生其他反應(yīng)，導(dǎo)致引物合成中產(chǎn)生突變。
- 藍(lán)色DMTrO基團(tuán)，在DNA亞磷酰胺單體的合成過程中，反應(yīng)反應(yīng)條件控制和工藝本身的問題，其保護(hù)率不高，5’仍有數(shù)部分OH未保護(hù)，導(dǎo)致在后期引物合成中發(fā)生副反應(yīng)，進(jìn)一步導(dǎo)致引物合成中產(chǎn)生突變。
- 黃色堿基，堿基的雜質(zhì)可能存在風(fēng)險(xiǎn)是核苷原料自帶非目標(biāo)堿基，例如dA中含有dC，導(dǎo)致dA的DNA亞磷酰胺單體含有dC的DNA亞磷酰胺單體，導(dǎo)致產(chǎn)生突變。
- 深綠色堿基保護(hù)基團(tuán)，因?yàn)楣に嚭驮系膯栴}，導(dǎo)致保護(hù)基完全保護(hù)，導(dǎo)致在后續(xù)的反應(yīng)中產(chǎn)生更多其他單體雜質(zhì)，進(jìn)而導(dǎo)致引物合成中生產(chǎn)突變。
浙江恒康藥業(yè)的NNaA平臺(tái)，源自醫(yī)藥千噸級(jí)產(chǎn)能原料藥符合ICH規(guī)范的GMP管理體系和近20年小分子原料藥研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，嚴(yán)格管控原料篩選、質(zhì)量控制、雜質(zhì)控制、工藝操作、生產(chǎn)管理、分析放行等等，并且根據(jù)客戶需求不斷優(yōu)化生產(chǎn)水平，用心生產(chǎn)和提供高純度、微水分、低雜質(zhì)的亞磷酰胺單體。
